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WB抗体 你选对了吗?

                                           发布于:2018-8-27

       随着生命科学的发展,对蛋白进行的研究与日俱增,检测方法中,首当其冲的要数WB检测,而抗体的选择对WB检测的成功与否具有非常重要的作用,面临着纷呈复杂的抗体试剂市场,如何选择到适合自己实验的抗体就变得尤为重要。如何选择适当的抗体,需要注意如下几个方面


意事项:

01 蛋白的简称

       在搜索抗体的时候,大家都会用到蛋白名称的简写。需要注意,一个蛋白抗原经常有多个简称,如CD31的别称有 PECAM1; PECA1; GPIIA等。例如,当你在网上搜索PECAM1的时候,结果搜索出来的是CD31抗体,这其实就是您要找的PECAM1抗体。当然,有时还会出现简称相同,但其实是不同蛋白的情况,需要大家引起注意。一定要用蛋白的全称来进行比对,如果一致,就是您要研究的蛋白抗体。


02 蛋白的亚型

      某些蛋白具有多种不同的亚型,如KRAS,HRAS,NRAS。这需要在选择抗体之前确定要研究的蛋白亚型。还有些抗体由于其抗原选择的是不同蛋白亚型共有的肽段区域,是可以同时识别多个亚型的,如,Anti-KRAS+HRAS+NRAS antibody,有些抗体公司会将抗体名称中加入(pan)字样来标明,如Anti-Pan Ras antibody,都是识别N-Ras, H-Ras and K-Ras 等多个亚型,反映的也是所有Ras亚型的总水平。


 03 抗体的应用

      有些抗体无法结合变性的蛋白,这就让它在western blot中表现很糟。选择购买的产品最好是经过内源性蛋白western blotting的验证,说明书中有验证图片的抗体比较可靠。


04 抗原的种属

      抗体一般会在出厂前对常见的不同种属样本进行内部验证,在Species Reactivity一栏中看到(如人、小鼠、大鼠等)。达到质检要求的种属会明确标记,以备参考。对于有些特殊物种的抗体,不在 Species Reactivity的种属里,可以通过联系抗体公司客服,将研究蛋白与抗原序列进行同源比对,如果是100%一致的,也是可以考虑使用的。


05 抗体的种属

      多为兔和小鼠,尽可能选择与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应,例如:检测小鼠样本蛋白,则不应选择小鼠或大鼠源的一抗,最好选兔源的一抗。


总之,在选择抗体时需要严谨。供应商的验证并不能完全取代自己的检验。你的样品不同,操作步骤也不完全相同。而这些因素都会影响抗体的表现,因此在进行western blot检测时,尽可能使用阳性对照,确保你的western blot能提供正确可靠的实验结果。


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