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荧光原位杂交(FISH)

                                           发布于:2018-5-14


1 FISH技术简介

2 FISH操作流程

3 FISH实验关键因素

4 FISH实验常见问题及解决方法



 

FISH技术简介

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荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridizationFISH)是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示核酸序列位置的方法。它利用荧光标记的核酸片段为探针与组织、细胞或染色体上待测DNARNA互补配对,结合成专一的核酸杂交分子,通过荧光检测系统将待测核酸在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。该技术具有快速,安全,灵敏度高以及探针可长期保存等特点,目前已广泛应用于细胞遗传学,肿瘤dafabet中文版,基因定位,基因作图,基因扩增及分子诊断等领域。


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FISH操作流程


                    


 


                


                  


1、玻片背景过强


A玻片上杂质未洗净


原因玻片本身质量问题,或使用前未彻底清理玻片


对策预先选择并彻底清洗玻片


B样品处理不彻底


原因细胞爬片未洗涤干净/组织切片预处理不完全


对策严格按照操作流程进行制样


C样品处理不彻底滤光片选择不当


原因对标记荧光所需波长不清楚


对策更换适当的滤光片组


 


2、信号特异性差


A、探针杂交液配比不当


原因不同探针所需杂交液不尽相同,需要因探针更换杂交液


对策可预先进行预实验确定最佳配比


B实验温度不当


原因FISH实验全程对实验温度要求较为严格


对策实验操作温度及孵育温度精确控制,可适当提高。


3、无杂交信号


A、样品/探针变性不充分


原因实验操作过程中,温度控制不精确


对策确保样品/探针达到变性温度,并可适当延长变性时间


B、变性探针未与样品充分接触


原因脱水乙醇未完全挥发或玻片下有气泡


对策脱水后确认玻片挥干备用,盖盖玻片后确认无气泡残留


 详情请见链接:

https://mp.weixin.qq.com/s/QWWXYjVVO7j72vwuHA_twQ

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